DNA和RNA浓度检测实验：基本原理

DNA链或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。当波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD ₂₆₀ 不仅与总含量有关，也随构型而有差异。

对标准样品来说，浓度为1μg/ mL时，DNA钠盐的OD ₂₆₀ =0.02；当OD ₂₆₀ =1时，dsDNA浓度约为50μg/ mL；ssDNA浓度约为37μg/ mL；RNA浓度约为40μg/ mL；寡核苷酸浓度约为30μg/ mL。

当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。一般情况下，应同时检测同一样品的OD ₂₆₀ 、OD ₂₈₀ 和OD ₂₃₀ ，计算其比值以衡量样品的纯度。

纯DNA的OD经验值：OD ₂₆₀ / OD ₂₈₀ ≈1.8（大于1.9，表明有RNA污染；小于1.6，表明有蛋白质、酚等污染）

纯RNA的OD经验值：1.7<OD ₂₆₀ / OD ₂₈₀ <2.0（小于1.7时表明有蛋白质或酚污染；大于2.0时表明可能有异硫氰酸残存）。一般地，OD ₂₆₀ / OD ₂₈₀ 的值用于估计核酸的纯度；OD ₂₆₀ / OD _23 0 的值用估计去盐的程度。对于RNA纯制品，其OD ₂₆₀ / OD ₂₈₀ ≈2.0，OD ₂₆₀ / OD _23 0 >2。若OD ₂₆₀ / OD ₂₈₀ <2.0，则可能是蛋白污染所致，此时可以增加酚抽提。若OD ₂₆₀ / OD _23 0 <2，则说明去盐不充分，此时可以再次沉淀并用70%乙醇洗涤。