【实验原理】
细胞培养是模拟机体内生理条件，在人工条件下培养离体细胞，使其生存、生长、繁殖和传代。可进行细胞生命过程、细胞癌变等问题的研究，已广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域。原代培养是直接由体内取出组织或细胞进行培养。由于原代培养的细胞离体时间短，性状与体内更相似，适用于研究，也为以后进行传代培养创造条件。原代培养可以分为组织块培养法和消化法。
【实验器材】
1.实验材料
小鼠、小牛血清、DMEM、胰酶、PBS缓冲液、医用酒精。
2.实验仪器
CO 2 培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压灭菌锅、水浴箱、离心机、饭盒、纱布、手术剪、眼科剪、眼科镊、烧杯、培养皿、离心管、培养瓶、青霉素小瓶、酒精喷壶、微量移样器。
【实验步骤】
1.实验准备
打开超净工作台电源开关，用医用酒精擦拭台面，摆放好实验用品，打开紫外灭菌灯，30分钟后关闭紫外灯，开启日光灯同时开启风机。
2.实验过程
（1）颈椎脱臼法处死小鼠，置75%酒精中浸泡1～2分钟，移入超净工作台内。
（2）用手术剪剪开腹腔，取出肝脏，置于盛有PBS缓冲液的培养皿中，清洗表面的血液等杂质。
（3）清除肝脏被膜、附着的脂肪及纤维结缔组织，用PBS缓冲液反复冲洗3遍。
（4）将肝组织转移到另一个盛有PBS缓冲液的培养皿中，剪成0.5～1mm 3 小块，同时用眼科镊将彼此分开。
（5）加入5～6倍体积0.25%胰酶，37℃孵育20分钟，之后加入含血清的DMEM以中止胰酶的消化作用。
（6）将消化好的肝组织块贴于培养皿中，加2～3mL培养液置37℃、5%CO 2 条件下培养。
【实验预期结果及分析】
组织块贴壁良好，24～48小时即可见组织块边缘有少量细胞长出。
【要点提示及注意事项】
1.实验过程中要严格无菌操作，防止污染。
2.加入胰酶消化时要注意消化时间。
3.组织块不能太大，否则影响贴壁。