酶是由活细胞生成的具有催化活性的蛋白质或RNA，是一种生物催化剂，广泛存在于生物体中。在对酶的研究中，酶的定量十分重要。酶的量影响降解率，并且在进行动力学实验室时，酶的量是一个需要精确控制的关键因素。目前，控制酶量的方法主要是测定的酶活力。所以，测定酶活是进行与酶相关实验的必要的步骤。根据1961年国际酶学会议的规定，酶活是酶活力的度量单位，1个酶活力单位是指特定条件（25℃，其他为最适条件）下，在1 min内，能转化1μmol底物的酶量（1U）。所以测定酶活大多是通过对底物经酶催化反应后的产物的测定来实现的，测定的方法主要是分光光度法。以产物的最大吸收波长为测定波长，根据单位时间内体系的吸光度的变化计算产物的单位时间生成量，从而计算出酶活。
漆酶（Laccase）是一种普遍分布于植物、昆虫、真菌和细菌中的重要酶种。它是一种氧化酶，能催化氧化酚类及有类似结构的有机物，需要氧气作为反应的氧化剂，其催化反应的还原产物是水，氧化产物与底物有关。
实验原理
近年来，通过NMR，EPR，CD光谱等一系列研究，以及与抗坏血酸氧化酶、血浆铜蓝蛋白等的比较分析，人们对漆酶的生物化学及结构特性有了较为深入的了解。该酶至少有一个Ⅰ型Cu 2＋ 和氨基酸残基结合成为单核中心，它使酶表现为明显的蓝色，且在 600 nm处有吸收。Ⅰ型Cu 2＋ 是底物氧化发生的活性点。另外它还包含一个由Ⅱ型Cu 2＋ 和两个Ⅲ型Cu 4＋ 构成的三核中心；Ⅱ型Cu 2＋ 没有特征吸收光谱，EPR研究表现出顺磁性；两个Ⅲ型Cu 4＋ 偶连成一个羟基桥，形成双核，这种结构会引起电子顺磁共振效应的消失。一个Ⅱ型Cu 2＋ 和两个Ⅲ型Cu 4＋ 构成的三核中心，将分子氧化还原为水。漆酶的铜中心结构如图20-1。
漆酶催化方式目前没有确定，其可能的催化方式如下。TypeⅠ Cu 2＋ 从还原态的底物吸收单电子，底物被氧化成自由基，进而导致各式各样的非酶促次级反应，如羟基化、歧化和聚合等。同时TypeⅠ Cu 2＋ 吸收的电子传递到三核中心的铜离子，分子氧在该中心被还原成水。还原氧分子到水经过两步双电子反应，第一步形成超氧化物过渡体，第二步再生成水。
图20-1 漆酶铜中心结构图
测定漆酶活力是评价漆酶性能以及保证生产中漆酶稳定性的常用方法。测定漆酶酶活较为常用的方法称为染料［2，2′-azino-bis（3-ethylbenz-thiazoline-6-sulfonic acid），ABTS］法测定，其基本原理是利用在氧气存在条件下漆酶将ABTS催化氧化成有色物质，在波长420 nm下，该物质有很强的特征吸收峰，利用该吸收峰的变化程度来测定酶的活性。以ABTS为底物进行漆酶的定量分析，通常在420 nm下测定3 min内吸光度的变化。根据吸光度值的变化，可计算出反应的酶液活性大小。
以ABTS为底物测定漆酶酶活是目前国外最为常见的方法之一。
它有如下优点。
（1）ABTS易溶于水，在室温下放置6个月仍较稳定。
（2）其反应只有一步，即从ABTS到它的阳离子自由基。ABTS的阳离子自由基在水溶液中呈浅蓝绿色，且比较稳定，通常在几个小时或几天之内是稳定的。
（3）在漆酶的作用下，ABTS有色溶液的摩尔吸光系数较高，说明以其为底物测定的灵敏度较高。
（4）到目前为止，还未有报道称ABTS有致癌作用、诱变作用或是强烈的毒性。