1.斑马鱼胚胎发育技术简介

斑马鱼常年产卵，其卵易收集，而且小规模饲养技术简单。斑马鱼胚胎发育技术更是具有材料方便易得、操作简单、可重复性及可靠性较高等优点，而且与传统的鱼类急性实验相比，具有成本低、影响因素少、灵敏度更高等方面的特点。所需要的设备只有倒置光学显微镜、光照恒温培养箱和普通的家庭养鱼装置。

生命早期发育阶段通常对毒性作用最敏感，而更加重要的是，不同作用机理的化合物在不同胚胎发育阶段（如卵裂、囊胚、原肠胚、成体节阶段）内不仅毒性作用表征不同，且敏感度也会有所改变。所以研究不同发育阶段可以为化合物毒理学研究提供特殊的信息，如毒物最敏感的毒理学指标和最关键的暴露时间，进而分析主要毒性物质的毒物作用机理等等。

该项技术的最大优势在于，可以在72 h内对近20种不同表现的反应指标进行观察和分析，而且可以同时记录数个指标，用于判断污染物的毒性作用类型（如遗传毒性、神经毒性、物理作用等）。

Ⅰ类指标代表致死性，Ⅱ类指标揭示化合物特定的作用方式。不同的化合物在各个毒理学终点的表现值不一样；某些化合物在一些毒理学终点会有其特有的指标。这一特点特别适合测定混合性工业污水的毒性，以初步判断污水中的毒性类型及潜在危害程度。而且Ⅱ类指标比Ⅰ类指标更为敏感。

2.实验准备

（1）斑马鱼的饲养

幼鱼混合饲养在曝气过24 h以上的水体内，水温保持（26±1）℃。每日喂2次经紫外消毒处理过的冷冻赤虫。每日下午换水10～15 L。保持光照/黑暗周期比14∶10。每天早上约8：30开灯、喂食。放收集器，收集器用铁丝网覆盖，上面固定一些塑料水草。1 h后根据Nagel法收集受精卵，用重组水迅速清洗鱼卵以除去残留物，进行试验。

（2）重组水的配制

为了保证实验过程中没有其他干扰，实验用水都是重组水。

（3）四溴双酚A储备液的配制

按照Nagel等人的长期研究和OECD指导设计胚胎毒性试验。称取0.10 g四溴双酚A（纯度99％）配成10 mL甲醇储备液。密封保存在冰箱-20℃的冷藏室。使用时用重组水稀释到需要的浓度，保证甲醇浓度不超过0.3％。

（4）毒理学终点的确定

在倒置显微镜下观察胚胎发育，记录发育过程中一些具有代表性的毒理学终点，用概率单位法计算EC ₅₀ ，LC ₅₀ 等毒性数据。