【实验原理】

细胞膜是脂质双分子层镶嵌蛋白质的结构，胞间侧表面有分支状糖外被，细胞与细胞之间的相互识别和联系、细胞的生长、细胞的分化、机体的免疫反应及肿瘤的发生等都与其有关。凝集素是一类含糖并能与糖基特异性结合的蛋白质，它能与细胞表面的糖分子相连接，在细胞间形成“架桥”，从而使细胞凝集。凝集素既可以促使细胞凝集，又能刺激细胞分裂。

【实验器材】

1.实验材料

家兔、土豆、韭菜、半夏、1%肝素溶液、PBS缓冲液、固体硫酸铵。

2.实验仪器

显微镜、天平、烧杯、研钵、载玻片、滴管、离心管、注射器等。

【实验步骤】

1.实验准备

（1）1%家兔红细胞悬液制备　用5mL注射器（含1%肝素溶液）抽取家兔耳缘静脉血液1mL，用生理盐水洗3次，每次离心5分钟（2000r/min）收集红细胞，最后按红细胞比容用生理盐水配成1%家兔红细胞悬液。

（2）凝集素制备

①土豆凝集素制备：用天平称取去皮土豆2g，切成小片置烧杯中，加入10mLPBS缓冲液浸泡1～2小时，可溶性的土豆凝集素即溶解于PBS缓冲液中，取出土豆，溶液备用。

②韭菜凝集素制备：用天平称取洗净的韭菜4g，剪碎，加入4mL生理盐水，充分研磨，过滤，滤液5000r/min离心10分钟，转移上清，弃去沉淀，加入硫酸铵（约0.4g/mL），5000r/min离心10分钟，弃上清，加入0.25mLPBS缓冲液溶解沉淀。

③半夏凝集素制备：用天平称取半夏2g，切成小块置研钵中研磨，加入5mLPBS缓冲液，过滤，滤液备用。

2.凝集反应

取4张载玻片，各滴一滴1%家兔红细胞悬液，之后分别滴加土豆凝集素、韭菜凝集素、半夏凝集素及PBS缓冲液各一滴于载玻片上，充分混匀，静置10分钟，低倍显微镜下观察红细胞凝集现象。

【实验预期结果及分析】

1.土豆、韭菜、半夏的凝集素均能使红细胞凝集。

2.PBS缓冲液为阴性对照，红细胞分散均匀，无明显变化。

【要点提示及注意事项】

1.韭菜凝集素提取中，韭菜一定要研磨充分，且加硫酸铵时要足量，否则会影响沉淀效果。

2.离心管放入离心机时，要先配平，然后对称放置在离心机内。