细胞膜通透性检测的实验原理和实验步骤

【实验原理】

细胞膜由脂质双分子层和膜蛋白组成,可控制细胞与外环境进行选择性的物质交换。

将红细胞放在低渗溶液中,由于细胞内外存在渗透压差,水分子大量渗入细胞内,导致细胞膜胀破,血红蛋白释放,这种现象称为溶血。

红细胞膜对不同相对分子量、不同脂溶性及电解质或非电解质等各种物质的通透性不同,溶质透过细胞膜的速度不同,溶血发生的时间也有差别。因此,可以通过测定溶血时间来判断物质渗入红细胞的速度。

【实验器材】

1.实验材料

家兔、0.17mol/L氯化钠溶液、0.17mol/L氯化铵溶液、0.32mol/L葡萄糖溶液、0.17mol/L醋酸铵溶液、0.17mol/L硝酸钠溶液、0.17mol/L草酸铵溶液、0.12mol/L硫酸钠溶液、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、1%肝素溶液、蒸馏水。

2.实验仪器

显微镜、烧杯、试管、试管架、微量移液器等。

【实验步骤】

1.10%家兔红细胞悬液制备

用5mL注射器(含1%肝素溶液)抽取家兔耳缘静脉血液1mL,用生理盐水洗3次,每次2000r/min离心5分钟收集红细胞,最后按红细胞比容用生理盐水配成10%红细胞悬液。

2.溶血实验

取1支试管,加入3mL蒸馏水,滴入3~5滴家兔红细胞悬液,混匀,注意观察颜色变化,溶液由不透明变为透明时记录发生溶血的时间。

3.细胞通透性不同的等渗溶液对红细胞溶血时间的影响

取9支试管,分别加入3mL各种等渗溶液,再每管滴加3~5滴家兔红细胞悬液,轻轻振荡混匀,注意观察试管内颜色变化,记录发生溶血的时间。

【实验预期结果及分析】

1.试管内溶液由不透明的红细胞悬液变为红色透明的溶液,即发生了溶血,镜下可见红细胞碎片。

2.由于红细胞膜对不同等渗溶液的通透性不同,溶质透过细胞膜的速度不同,因此不同等渗溶液中红细胞悬液的溶血时间有差别。

【要点提示及注意事项】

1.注射器先用1%肝素溶液浸润,防止发生凝血。

2.各试管内加入的试剂量及红细胞悬液量应保持一致,且应做好标记。

3.试管中加入红细胞悬液后混匀时,不要剧烈摇晃,以免造成人为的溶血。

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