双抗体夹心法检测HBsAg:基本原理
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎病毒(HBV)的标志物,检测血清中HBsAg是诊断HBV感染的重要指标。
酶联免疫吸附试验(ELISA)将抗原抗体的特异结合与酶的高效特异催化相结合,用来检测、定量特定蛋白质,应用非常广泛。ELISA有4种基本类型:夹心法(包括双抗原夹心法和双抗体夹心法)、间接法、竞争法及捕获法。其中,双抗体夹心法是检测抗原(如HBsAg)最常用的方法。
双抗体夹心法的基本原理是:
将特异性抗体与固相载体连接,形成“固相抗体”;加入待测样品,样品中的抗原与固相抗体结合形成“固相抗体-抗原复合物”;再加入酶标抗体,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体复合物”,即“双抗体夹心复合物”;最后加入酶的底物,在酶的催化下底物反应生成有色产物,根据颜色的深浅(吸光度)判定样品中抗原的量。