噬菌体污染的检测

要判断发酵过程有无感染噬菌体，最根本的方法是做噬菌斑检验。在无菌培养皿上倒入培养生产菌的灭菌培养基（加琼脂）作下层。同样地，培养基中加入20％～30％培养好的种子液，再加入待测发酵液，摇匀后，铺上层。培养12～20h后观察培养皿上是否出现噬菌斑。

也可以在上层培养基中只加种子液，而将待测发酵液直接点种在上层培养基表面，培养后观察有无透明圈出现。

噬菌体的防治措施

噬菌体的防治是一项系统工程，涉及到发酵生产管理的方方面面。从菌种保藏、种子培养、培养基灭菌、无菌空气制备、生产设备管理、检测分析到环境卫生等各个环节，必须规范操作，严格把关，才能有效地防治噬菌体的危害。应严禁活菌体排放，切断噬菌体的“根源”；做好环境卫生，消灭噬菌体与杂菌；严防噬菌体与杂菌进入种子罐或发酵罐内；抑制罐内噬菌体的生长；轮换使用菌种或使用抗性菌株。

1.定期检查，及时消灭噬菌体

日常生产中要加强各环节噬菌体的检测，以便早发现、早治理，防患于未然。在发酵过程中一旦发现噬菌体的危害，应立即对全厂各工序的空气过滤系统、发酵液、排气口、污水口以及周围环境进行取样检测，找出噬菌体较集中的地方，采取相应的措施消灭噬菌体和杂菌。例如，对于种子室和摇床间，可采用甲醛熏蒸及紫外线处理的方法；对于常用工具、发酵罐体表面及墙壁地面，可采用新洁尔灭及石炭酸溶液喷雾或擦洗；对于发酵罐内部及管道系统，则可采取蒸汽灭菌的方法。

2.加强管理，严格执行操作规程

种子和发酵工段的操作人员要严格执行无菌操作规程，认真进行种子保管，不使用本身带有噬菌体的菌种。不得将感染噬菌体的培养物带入菌种室、摇瓶间。认真进行发酵罐、补料系统的灭菌。严格控制逃液、取样分析和洗罐所废弃的菌体。对倒罐、取样分析所排放的废液必须先灭菌后排放。

3　选育抗噬菌体菌株和轮换使用生产菌株

选育抗噬菌体菌株是一种有效的手段。所获得的抗性菌株既要有较全面的抗性，又要能保持原有的生产能力。但有的菌种在选育中很难做到既有抗性又能保持原有的生产能力。目前比较实用的方法是轮换使用生产菌株。针对噬菌体对寄主侵染的专一性，采用轮换使用生产菌株的方法，可有效防止噬菌体的蔓延和危害，保证生产的正常进行。

4.噬菌体污染的应急措施

发现了噬菌体污染时，首先必须取样检查，并根据各种异常现象做出正确的判断，尽快采取相应的挽救措施。常用的应急方法有以下几种：

①加入少量药物，以阻止噬菌体繁殖。如加少量草酸及柠檬酸等螯合剂阻止噬菌体吸附；加一些抗生素抑制噬菌体蛋白质的合成及增殖，该法仅适用于耐药的生产菌株，由于成本较高，无法在较大的发酵罐中使用。

②发酵过程中污染噬菌体时，可补入适量的新鲜培养基或生长因子（如玉米浆、酵母膏等），促进生产菌生长，加快发酵速度，使发酵得以顺利进行。

③大量补接种子液或重新接种抗性菌种培养液，以便继续发酵至终点，防止倒灌，尽可能减少损失。在补种之前也可对已感染噬菌体的发酵液进行低温灭菌处理。