酵母蔗糖酶的化学修饰:实验原理

酶分子中的许多侧链基团可以被化学修饰。

酶的化学修饰是研究酶结构与功能的重要方法,对酶侧链基团进行化学修饰,不仅可以明确酶活性部位的组成,也可为改进酶的原有性质(如稳定性等)提供理论基础。当化学修饰试剂与酶分子上的某种侧链基团结合后,酶的活性降低或者丧失,表明这种被修饰的基团是酶活性所必需的。酶分子中有许多基团,如巯基、羟基、咪唑基、胍基、氨基和羧基等可被共价化学修饰,如苯甲基磺酰氟(PMSF)是丝氨酸残基的修饰剂,三硝基苯磺酸(TNBS)是赖氨酸残基的修饰剂, -乙基马来酰亚胺(NEM)和对氯汞苯甲酸(PCMB)是巯基的修饰剂,碘乙酸(IAc)是组氨酸残基的修饰剂、 -溴代琥珀酰亚胺(NBS)是色氨酸残基的修饰剂,二硫苏糖醇(DTT)可以特异性修饰二硫键,EDTA是金属离子的螯合剂,可与酶活性中心的金属离子发生作用。

本实验以酵母蔗糖酶为材料,分别以PMSF、TNBS、PCMB、IAc、NBS、DTT和EDTA为化学修饰剂,研究酵母蔗糖酶活性所必需的氨基酸残基,酶活性测定采用DNS法。

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