水蛭素的提取与分离纯化：实验原理

水蛭素是水蛭及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65~66个氨基酸组成的小分子蛋白质（多肽）。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。

水蛭素是一类很有前途的抗凝化瘀药物，它可用于治疗各种血栓疾病，尤其是静脉血栓和弥漫性血管凝血的治疗；也可用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管再造后血栓的形成；改善体外血液循环和血液透析过程。研究还表明，水蛭素在肿瘤治疗中也能发挥作用，它能阻止肿瘤细胞的转移，已证明有疗效的肿瘤（如纤维肉瘤、骨肉瘤、血管肉瘤、黑素瘤、白血病等）。水蛭素还可配合化学治疗和放射治疗，由于促进肿瘤中的血流而增强疗效。水蛭素比较稳定，胰蛋白酶和糜蛋白酶并不破坏其活性，而且水蛭素的某些水解片段仍有抑制凝血作用。

蛋白质（多肽）的分离纯化方法很多，主要有：

①根据蛋白质溶解度不同的分离方法，包括盐析、等电点沉淀、低温有机溶剂沉淀等；

②根据蛋白质分析大小的差异的分离方法，例如渗析、超滤、凝胶过滤等；

③根据蛋白质电性质进行分离，比如电泳、离子交换层析等；

④根据配体特异性的分离方法——亲和色谱法。采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。

本实验采用水有机溶剂混合体系提取水蛭素粗品，DEAE-52纤维素离子交换柱进一步纯化。