酵母RNA的提取:实验原理

酵母RNA的提取:实验原理

核酸(RNA)是一类不稳定的生物大分子,在制备过程中很容易发生降解。因此,要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态,制备核酸必须采取温和的条件,例如避免过酸过碱,避免剧烈的搅拌,防止核酸降解酶类的作用。

由于RNA种类较多,所以制备方法也各异。工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。稀碱法是用1%NaOH溶液,将细胞壁溶解,用酸中和,升高温度使蛋白质变性,将蛋白质与核酸分离,然后除去菌体,将pH调至RNA的等电点(pH=2.5),使RNA沉淀出来。稀碱法的优点是抽提时间短,但RNA在此条件下不稳定,容易分解。浓盐法是用10%NaCl溶液改变细胞膜的通透性,使核酸从细胞内释放出来,该法提取RNA时要注意掌握温度,避免在20~70℃之间停留时间过长,因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围,会使RNA因降解而降低提取率。利用加热至90~100℃,使蛋白质变性,破坏该酶类,有利于RNA的提取。

若要提取接近天然状态RNA,可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白,然后用乙醇沉淀RNA,离心收集。

本实验采用浓盐法(10%NaCl)。

版权声明:本篇文章(包括图片)来自网络,由程序自动采集,著作权(版权)归原作者所有,如有侵权联系我们删除,联系方式(QQ:452038415)。http://www.apmygs.com/3003.html
返回顶部