植物叶绿素含量的测定方法

叶片是植物光合作用的主要器官。叶绿素是植物光合作用最重要的色素,由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿素的重要组分,约占叶绿素总量的75%左右。高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿素吸收的,因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关。在一定范围内,光合速率随叶绿素含量的增加而升高。另外,叶绿素的含量是植物生长状态的一个反映,某些环境因素(如干旱、盐渍、低温、大气污染、元素缺乏)可以影响叶绿素的含量与组成,进而影响植物的光合速率。因此,叶绿素含量的测定对植物的光合生理与逆境生理研究具有重要意义,同时,叶绿素含量也是指导作物栽培生产和选育作物品种的重要指标。

提取、分离和测定叶绿素是研究它们的特性及作用的第一步。叶绿素不溶于水,溶于有机溶剂,可用多种有机溶剂(如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等)研磨提取或浸泡提取。叶绿素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收值,用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度),再根据叶绿素在该波长下的吸光系数即可计算叶绿素含量。

利用分光光度计测定叶绿素含量的依据是LambertBeer定律,即当一束单色光通过溶液时,溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。其数学表达式为:

A=Kbc

式中,A为吸光度;K为吸光系数;b为溶液的厚度;c为溶液浓度。

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