2.凝胶过滤层析

凝胶层析亦称凝胶过滤、排阻色谱或分子筛层析等。其机理是分子筛效应，主要根据蛋白质分子的大小进行分离和纯化。层析柱中的填料通常是惰性的多孔网状结构物质，混合样品如同“过筛”一样，因分子大小的不同得以分开。分子量大的物质不能进入凝胶粒子内部，先随洗脱液从凝胶粒子之间的空隙挤落下来，所以大分子物质迁移速度快；小分子物质要通过凝胶网孔进入凝胶粒子内部，因此小分子物质迁移速度慢。根据网孔不同可制成不同规格。

常用分子筛：

（1）葡聚糖凝胶（Sephadex G）。

（2）琼脂糖凝胶（Sepharose、Bio-Gel A）　孔径大，用于分离大分子物质。

（3）聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P）　由丙烯酰胺单体与次甲基双丙烯酰胺进行交联聚合而成的。

选择何种凝胶及型号，需要根据实验条件、溶质的分子量大小和分离的目的而定，每种型号凝胶都有一定分离溶质分子量的范围，选择的凝胶型号要能满足实验要求。排阻极限是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的分子量。所有大于排阻极限的分子都不能进入凝胶颗粒内部，直接从凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗脱出来。排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分子量，大于这种凝胶排阻极限的分子用这种凝胶不能得到有效分离。例如Sephadex G—50的排阻极限为30000，即分子量大于30000的分子都将直接从凝胶颗粒之外被洗脱出来。