海带多糖的提取与含量测定:实验原理

3.去除蛋白质的方法

采用水提醇沉或其他溶剂沉淀所获得的多糖,常混有蛋白质,除去蛋白质常用以下几种方法。

(1)Sevag法:于多糖的水溶液中加入1/5体积的氯仿-丁醇(5∶1,体积比)混合液后,剧烈振摇20min,离心,分去水层与溶液层交界处的变性蛋白。此法去蛋白较温和,但需要重复多次才能完全除去蛋白,少量蛋白则用Sevag法除去。

(2)酶解法:在糖水溶液中加入水解蛋白酶,如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等,使糖样品中蛋白质降解。

(3)三氟三氯乙烷法:于多糖水溶液中加入等体积的三氟三氯乙烷,搅拌10min,离心分出水层,水层再同法处理2次,可完全除去多糖中的蛋白。

(4)三氯醋酸法:在多糖水溶液中缓慢加入3%三氯醋酸,直到不再浑浊为止,于5~10℃放置过夜,离心除去胶状沉淀即可。

(5)鞣酸沉淀法:鞣酸易与蛋白形成沉淀。

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